支原體清除試劑1(1000x)

使用方法

（一）支原體清除試劑 1

1. 使用之前，先將支原體清除試劑1用 PBS或者無血清培養液稀釋10倍后，放 4℃冰箱保存。

2. 將 50-100萬個細胞鋪到 60mm的細胞培養皿內，加入4mL含支原體清除試劑1的正常細胞培養液（使用稀釋 10倍后的支原體清除試劑 1，按 1:100 比例加入）。

3. 每 2-3天更換細胞培養液。換液時，用 PBS沖洗 2-3 遍細胞，以將死亡的支原體清洗干凈。而后加入新鮮的含支原體清除試劑1的正常細胞培養液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要yi酶消化），并更換新的培養皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規檢測，以保證沒有新的支原體污染。

l 建議將細胞分成三份：第一份添加清除試劑1，第二份添加清除試劑2，第三份同時添加清除試劑1和清除試劑2進行殺滅（注：同時添加兩種藥物可能對細胞的毒性較大，但是殺滅的概率會非常高）， 這樣支原體對兩種藥物同時產生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。如果同時添加清除試劑 1 和清除試劑 2，細胞可以每 2 天更換一次培養液。

l 處理過程中，注意每天觀察細胞的狀況，如果發現支原體清除試劑對細胞的毒性較大，可以加大培養液中的血清濃度或者提高細胞的密度。

l 清除試劑1和清除試劑2在降低濃度后（使用稀釋10倍后的支原體清除試劑1或者 2，再按 1:500 比例加入，即藥物的最終稀釋比例為 1:5000）也可以加入到培養液中作為短期（1-2個月）的支原體污染預防藥物，但是不建議在細胞培養液中長期（超過2個月）加入，因為有可能導致對該兩種藥物有抗性的支原體出現。