脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 6G，是一種新型多功能的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA和RNA)轉(zhuǎn)染入真核細胞，具有低細胞毒性；對多種類型的細胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點。經(jīng)證明可以將各種有效載荷有效地轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細胞系中。研究人員將 Lipofectamine 6G 試劑用于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染以及基于 siRNA 和 shRNA 的基因敲除實驗、基因表達研究。

2-4℃保存，有效期?年。（避免冷凍）

產(chǎn)品應(yīng)用及說明

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染對大多數(shù)細胞來說，DNA(µg)與Lipofectamine 6G (µl)的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時高的細胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達水平，并能減少細胞毒性。      1. 以24孔板為例      貼壁細胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用500 µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5～2×105細胞，使之第二天能達到70-90%匯合。      懸浮細胞：在準(zhǔn)備Lipofectamine 6G復(fù)合物之前，用500 µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種4～8×105細胞即可。      2. 對每個轉(zhuǎn)染樣品，進行以下操作      a. 在eppendorf管里分別加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA輕柔混勻，制成DNA稀釋液。      b. 在另一個eppendorf管里分別加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipofectamine 6G (注意用前先混勻)，輕柔混勻，制 成Lipofectamine 6G 稀釋液，室溫靜置5分鐘。c. 將DNA稀釋液和Lipofectamine 6G稀釋液混合,輕柔混勻,室溫靜置20分鐘,形成Lipofectamine 6G復(fù)合物。Lipofectamine 6G復(fù)合 物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時。3. 將Lipofectamine 6G復(fù)合物加入到接種好的細胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動，使復(fù)合物分散均勻。4. 在37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)18～48小時。5. 如果要篩選穩(wěn)定細胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時后將細胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進行篩選。備注：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化 為達到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細胞毒性的影響，可以對DNA和Lipofectamine 6G的比例以及細胞密度進行優(yōu)化，一般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA (µg)和Lipofectamine 6G (µl) 的比例。