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詳細介紹
| 品牌 | BIOHUB | 供貨周期 | 一個月 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品詳情KlenTaq-S 測序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版，為 Taq DNA 聚合酶的大片段，并做了基因突變。本酶具有 5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA 聚合酶，KlenTaq-S 測序酶具有很強的 ddNTP 的滲入能力，因此其適用于終止法 DNA 測序或焦磷酸解反應 SNP 分析。
本公司 KlenTaq-S 測序酶是重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。
活性定義活性單位指在 72℃下， 1×AM PCR Buffer 1，30 min 內將 10 nmole dNTP 摻入酸不溶性物質所需的酶量。特點
1.尤其適合 ddNTP 等修飾核苷酸的摻入反應
2.相比全長 Taq DNA 聚合酶，本酶比活性有所降低
適用范圍
ddNTP 終止法DNA 測序（一代測序）
焦磷酸解反應延伸法 SNP 分析
質量控制
經過嚴格的質控檢測，確保該產品具有最高的活性和純度。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.
應用舉例
以下反應舉例為 50 μl 標準 PCR 體系，僅供參考。實際 PCR 條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。
1） 按下表配制反應體系
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×AM PCR Buffer 1 | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
KlenTaq-S測序酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*模板DNA用量參數(50 μl反應體系):
人基因組DNA100-1000 ng ; 微生物基因組DNA 10-100ng；PCR產物 1 ng-10 ng； Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。
2） 按如下條件進行反應，
95℃ | 2-5 min | |
95℃ | 15 sec |
25-35 Cycles |
55~72℃ | 20 sec | |
72℃ | 1kb/min | |
72℃ | 5 min |
3） 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR 產物，或按實驗目的進行后續操作。
注意事項1.PCR 條件和野生型 Taq DNA 聚合酶類似，對特定 DNA 的測序反應可能需要優化。2.本酶擴增能力較野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低，PCR 產量有所降低，不建議用于常規 PCR。3.不可用于 Taqman 探針法 q-PCR。 濃度5U/uL運輸與保存
-20℃可保存 2 年，避免反復凍融
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